登革病毒型PCR检测试剂盒检测

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法

1.

血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.

血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。

3.

细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。

4.

组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。

5.

保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

定量PCR方法：

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PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度

IgM/Cy5.5 Cy5.5

标记的羊抗小鼠IgM 0.1ml

Filaggrin： 兜甲蛋白抗体 0.1ml

白细胞粘附蛋白抗体 Anti-CD18/LFA-1 0.2ml

Anti-NR2C/NMDAR2C /FITC 荧光素标记谷受体2C抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLSCR3 0脂爬行酶3抗体 规格 0.2ml

Anti-CD167a(DDR1)/HRP 辣根过氧化物酶标记CD167a抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml
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Rhesus antibody Rh Phospho-CHK2 (Thr68) 0酸化细胞周期检测点2抗体 规格 0.1ml

兔抗豚鼠IgG血清 0.5ml 国产

WNT7A 英文名称： 原癌基因wnt7a蛋白抗体 0.1ml

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Anti-ABCB6 ATP结合蛋白家族6抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1.

标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2.

用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。

3.

在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.

换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.

换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.

重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备

7.

用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8.

如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9.

如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。